厭氧培養(yǎng)箱的氧氣置換是一個(gè)關(guān)鍵步驟，以確保培養(yǎng)箱內(nèi)部形成無(wú)氧或低氧環(huán)境，從而滿足厭氧微生物的生長(zhǎng)需求。以下是一個(gè)詳細(xì)的置換氧氣步驟：
一、準(zhǔn)備階段
- 放置附件和器具：按使用要求放置好必要的附件和器具。
- 開(kāi)啟電源和照明：通電源開(kāi)照明燈，開(kāi)啟溫控儀，調(diào)節(jié)至所需溫度。
- 放入干燥劑和指示紙：在操作室內(nèi)放入干燥劑和美蘭指示紙（封閉狀態(tài)），用于檢測(cè)氧氣含量和濕度。
二、氮?dú)庵脫Q階段
- 密封手套：將乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊，以防止氣體泄漏。
- 氮?dú)膺M(jìn)氣：接通氮?dú)膺M(jìn)氣路，打開(kāi)氮?dú)饪刂崎y，使手套鼓起，然后關(guān)閉閥門，并再次扎緊袋口。
- 重復(fù)置換：重復(fù)上述充氮過(guò)程，至少進(jìn)行兩次氮?dú)庵脫Q。每次置換前，應(yīng)確保取樣室先抽真空，并用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
三、混合氣體置換階段
- 調(diào)整混合氣體：混合氣體通常包含氮?dú)猓∟2）、氫氣（H2）和二氧化碳（CO2），按一定比例（如N2 85%、H2 10%、CO2 5%）混合。
- 混合氣體進(jìn)氣：調(diào)換氣路，打開(kāi)混合氣閥進(jìn)氣。充氣時(shí)，取樣室應(yīng)先抽真空，并隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
- 調(diào)整流量計(jì)：關(guān)掉混合氣體閥后，打開(kāi)另一閥門，使混合氣體經(jīng)過(guò)流量計(jì)。調(diào)整流量計(jì)，使流量控制在每分鐘10ml左右。
- 重復(fù)置換：重復(fù)上述混合氣體置換過(guò)程2~3次，以確保操作室內(nèi)形成穩(wěn)定的厭氧環(huán)境。
四、后續(xù)處理
- 催化除氧：打開(kāi)操作室內(nèi)的除氧催化器電源，進(jìn)行催化除氧。一小時(shí)后，打開(kāi)美蘭指示紙觀察其顏色變化，如不變色則表明操作室內(nèi)已達(dá)到厭氧環(huán)境。
- 滅菌處理：開(kāi)啟紫外線燈，對(duì)操作室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時(shí)間可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求自定。
五、注意事項(xiàng)
- 氣體壓力控制：在置換過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格控制氣體的輸入壓力，以防爆管或損壞設(shè)備。
- 定期檢查：連續(xù)使用厭氧培養(yǎng)箱時(shí)，應(yīng)定期檢查和補(bǔ)充除氧劑和干燥劑，確保室內(nèi)厭氧條件的維持。
- 安全操作：在操作過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守安全操作規(guī)程，防止氣體泄漏或設(shè)備損壞。
通過(guò)以上步驟，可以有效地將厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)的氧氣置換出去，為厭氧微生物的生長(zhǎng)提供一個(gè)適宜的無(wú)氧或低氧環(huán)境。
